摘要：目的建立高效液相色谱法测定大叶蛇葡萄中蛇葡萄素含量的方法。方法色谱条件：AngilentTC-C18柱(4.6mm×250mm，5m)，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85，V/V)，检测波长为290nm。

　　大叶蛇葡萄AmpelopsismegalophyllaDielset.Gilg是葡萄科蛇葡萄属的一种植物，是湖北恩施地区民间习用中草药，其性平，味酸、涩，具有清热利湿、活血化淤之功效，用于治疗痢疾、泄泻、小便淋痛、头昏目胀、高血压等病[1]。现代药理学研究表明，大叶蛇葡萄中的主要化学成分蛇葡萄素具有多种药理活性，如保肝护肝、抗肿瘤和降压等[2～4]。本实验室已对大叶蛇葡萄有效部位进行了指纹图谱研究[5]。为了更好地控制其质量，本文用高效液相色谱(HPLC)法对不同来源的大叶蛇葡萄中的蛇葡萄素进行了含量测定。

　　1仪器与材料Agilent-1100系列高效液相色谱仪(四元泵);紫外检测器及配套色谱工作站;KQ-250B型超声超声波清洗器昆山市超声仪器有限公司);AL204型万分之一电子分析天平(Mettler-ToledoGroup)。对照品蛇葡萄素自制，从大叶蛇葡萄中提取分离得到，经UV、MS、H-NMR、IR光谱分析鉴定结构，并经HPLC面积归一化法检测，含量98.0%;大叶蛇葡萄(2009-02采自湖北恩施地区，并由本院生药教研室鉴定)。乙腈为色谱纯;水为双蒸水，其余试剂均为分析纯。

　　2.2对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的蛇葡萄素对照品适量，加甲醇制成每毫升含蛇葡萄素0.101mg的溶液，作为对照品溶液。

　　2.3供试品溶液的制备精密称取样品(过60目筛)约0.1g置锥形瓶中，甲醇25ml，浸泡30min，超声提取30min，甲醇定容至30ml，摇匀，过滤，精密吸取续滤液1ml于25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

　　2.4系统适用性实验取对照品溶液、供试品溶液于上述色谱条件下进样，得HPLC图(见图1)。结果在该色谱条件下，供试品在对照品色谱保留时间相应处有相应色谱峰，且样品可得到较好的分离，理论塔板数按蛇葡萄素峰计算大于3000。

　　2.5线性范围的考察精密量取对照品溶液1，2，4，6，8，10ml于10ml量瓶中，加甲醇至刻度，配置成浓度分别为0.0101，0.0202，0.0404，0.0606，0.0808，0.101mg/ml的对照品溶液，按上述色谱条件依次注入高效液相色谱仪，以峰面积(Y)为纵坐标，以标准品的浓度(X)为横坐标，得蛇葡萄素回归方程：Y=24061X 40.07(r=0.9999，n=6)。结果表明，蛇葡萄素对照品在0.101～1.101g范围呈良好的线精密度实验精密吸取蛇葡萄素对照品溶液10l，连续进样6次，测定峰面积值，计算RSD为0.66%。结果表明，仪器精密度良好。

　　2.7稳定性实验取供试品溶液10l分别于0，2，6，8，12，24h间隔进行测定，测得结果基本一致，峰面积的RSD为1.20%。结果表明，供试品溶液在24h内稳定。

　　2.8重复性实验取同一批样品按供试品溶液的制备方法平行制备6份，按上述色谱条件进行测定，测定各自含量，其RSD为1.50%。结果表明，该方法重复性良好。

　　2.9加样回收实验精密称取已知含量的6份样品各50mg，分别精密加入蛇葡萄素对照品适量，按供试品制备和含量测定项下方法操作，结果平均回收率为99.65%，RSD为1.49%。

　　2.10样品含量测定精密称取各样品0.1g，按“2。3”项下方法操作，按上述色谱条件进样10l测定蛇葡萄素峰面积，，以外标两点法计算含量。结果见表1。表1不同来源大叶蛇葡萄中蛇葡萄素含量测定结果(略)

　　3讨论本文在样品制备方面比较了回流提取法、索氏提取法和超声提取法，发现超声提取法提取完全、操作简便，同时比较了浸泡时间和超声提取时间发现皆以30min为宜。

　　现代研究表明蛇葡萄素有很多种药理活性[2]，本次的测定结果表明，其在大叶蛇葡萄中的含量为30%左右，因此，该药物具有广阔的开发利用前景。

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