药用甘草为豆科植物乌拉尔甘草GlycyrrhizauralensisFisch.，胀果甘草GlycyrrhizainflataBat.或光果甘草GlycyrrhizaglabraL.的干燥根及根茎，是多年生药用草本植物。植化研究表明甘草中存在大量的酚类成分，这些具有生物活性的成分有望成为开发新药的来源[1]。甘草查尔酮A(licochalconeA)是存在于甘草中的一种酚类查尔酮化合物[2]，临床及药理研究表明，甘草查尔酮A具有抗氧化[3]、抗炎[4]、抗菌[5]、抗肿瘤[6]、抗利什曼原虫病[7]、免疫促进和雌激素样[8]等活性，在临床上具有广泛的应用前景，但有关其含量测定的方法还未见报道。本文建立了甘草查尔酮A的HPLC含量测定方法，为进一步开发甘草中这一重要活性成分提供简便可行的检测方法。

　　美国Agilent1100液相色谱仪系统;KQ-100DB型数控超声波清洗器昆山市超声仪器有限公司)。

　　甘草由新疆昆仑神农有限公司赠送，经新疆甘草种植中心鉴定分别为乌拉尔甘草GlycyrrhizauralensisFisch.，胀果甘草GlycyrrhizainflataBat.和光果甘草GlycyrrhizaglabraL.。甘草查尔酮A对照品，本实验室自制，经质谱、碳谱和氢谱鉴定为甘草查尔酮A(licochalconeA),归一化测定含量为98.81%。乙腈、甲醇为色谱纯;水为重蒸水;其他试剂均为分析纯。

　　2.1.1对照品溶液的制备准确称取在60℃干燥至恒重的甘草查尔酮A对照品适量，用流动相配成浓度为0.1mgml-1的对照品储备液，待用。

　　2.1.2供试品溶液的制备准确称取干燥恒重甘草粉末(过60目筛)0.5g，置100ml具筛锥形瓶中，加入甲醇25ml，超声处理(功率200W，频率40kHz)30min，过滤，再加入甲醇20ml，超声处理30min，合并滤液，减压浓缩至干，加流动相溶解并定容至50ml，微孔滤膜(0.45m)过滤，即得供试品溶液。

　　准确吸取甘草查尔酮A对照品储备液2，4，6，8，10ml分别置于5个10ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度。分别吸取上述对照品溶液各10l，依次注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以浓度C(g/ml)为横坐标，色谱峰面积A为纵坐标，绘制标准曲线，线精密度实验

　　准确吸取浓度为100gml-1的甘草查尔酮A标准品溶液10l，重复进样5次，测得峰面积值，计算相对标准偏差RSD为1.51%，说明仪器良好。

　　准确称取同一批次的胀果甘草5份，按“2.1.2”项下制备样品溶液，依次测定，根据标准曲线换算甘草查尔酮A的含量，计算甘草查尔酮A含量的RSD为2.54%，表明实验方法重复性较好。

　　取同一份待测供试品溶液，在0,2,4,8,12h进样测定，测得甘草查尔酮A峰面积值并计算样品峰面积的RSD为1.72%，表明供试品溶液于12h内稳定。

　　准确称取已知含量的样品约0.1g(共5份)，精密加入0.10mg/ml的甘草查尔酮A标准品1ml，按“2.1.2”项下方法制备所需溶液，测定并计算含量。表1结果表明甘草查尔酮A平均回收率为98.76%，RSD为1.94%。表1样品加样回收率实验结果(略)

　　按照本方法的测定条件，分别测定《中国药典》收录的3种甘草样品，计算甘草查尔酮A的含量，结果见表2。甘草查尔酮A标准品及样品HPLC图谱见图1～2。表2甘草查尔酮A含量测定结果(略)

　　比较了乙腈-水(60∶40)、甲醇-水(70∶30)、甲醇-水-冰醋酸(60∶40∶1)、乙腈-甲醇-水(40∶30∶30)等流动相体系，结果第3种流动相分离效果最好，所以，本文选用甲醇-水-冰醋酸(60∶40∶1)为流动相。

　　比较了不同提取溶剂(甲醇，乙醇，丙酮)和提取方法(回流提取，索氏提取，超声提取)的提取效果，结果表明甲醇对甘草查尔酮A的提取效果优于其他两种溶剂，索氏提取和超声提取的效果相当，均优于回流提取，但索氏提取耗时较长，故本文以甲醇为提取剂采用超声提取制备样品供试溶液。

　　3.3检测波长的选择在200～700nm之间对甘草查尔酮A对照品溶液进行光谱扫描，结果表明在372nm处有极大吸收，故选择372nm为检测波长。

　　结果表明该方法简单，快捷，专属性强，准确度高，具有良好的重复性，可用于甘草中甘草查尔酮A的含量测定。

　　● 电子流控阀(EFC)控制的毛细液相泵系统，精度高、流速范围广 柱流速范围：1-20ul/min;10-100ul/min(可选件)